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ELISA试剂盒抗原包被挑选

点击次数:27 发布时间:2018/1/11

现在检测抗HCVELISA试剂盒中所用包被抗原大多为依据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。在流行症诊断中,不少重组抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中获得使用。组成多肽抗原是依据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工组成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇,纯度高,特异性也高,但由于分子量太小,往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质(BSA)等偶联,借助于偶联物与固相载体的吸附,间接地结合到固相载体外表。

ELISA试剂盒兽药残留检测大部分药物因分子量小,难于直接吸附于固相载体上,因此需要将小分子药物通过改形成适宜的半抗原,再将半抗原与大分子的载体蛋白偶联(通常是使用半抗原分子中含有必定数量的游离基团,如巯基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等,这些基团可与蛋白质分了中的对应基团在偶联剂的效果下发作偶联反响),然后形成半抗原-载体蛋白复合物,半抗原-载体蛋白复合物通过载体蛋白吸附到固相载体上,完成小分子药物的包被进程。常用的载体蛋白有: 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白(HSA)、牛的免疫球蛋白(TRP)、鸡的卵清蛋(OVA)、血蓝蛋白(KLH)等。  
使用多肽抗原的另一留意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体发作的决定簇,因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发作反响。别的,某些微生物发作变异时往往发作抗原结构改变,在这种情况下,用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。

ELISA试剂盒临床用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和组成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物安排、微生物培育物等,须经提取纯化才干作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培育物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的资料中提取等(例如AFP从脐带血或胎肝中提取)。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的长处是除工程菌成份外,其他杂质少,并且无传染性,但纯化技能难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充沛除大肠杆菌成份,用于ELISA,在反响中可呈现假阳性,因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然资料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HCV)尚不能培育成功,并且丙肝患者血清中HCV抗原含量极微。

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